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ELISA檢測(cè)試劑盒在處理和保存方面要考慮哪幾個(gè)方面

更新日期: 2019-04-15
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   ELISA檢測(cè)試劑盒通常,酶聯(lián)免疫反應(yīng)曲線是規(guī)則的,如果曲線不規(guī)則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性差,宜做平行樣修正。做三平行樣取中間值,也可做雙平行樣,取算術(shù)平均值,但做雙平行樣時(shí)兩個(gè)樣本檢測(cè)值相差>20%時(shí)宜將該數(shù)值全部刪除。在ELISA檢測(cè)試劑盒中通常有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶聯(lián)系物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行產(chǎn)生氣泡。加標(biāo)本通常用微量加樣器,按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,避免發(fā)作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
 
  ELISA檢測(cè)試劑盒在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面:
 
  (1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
 
  (2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
 
  (3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。
 
  (4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
 
  (5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
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