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熒光定量PCR原理概述

更新日期: 2019-06-05
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熒光定量PCR是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。
熒光定量PCR原理概述
PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時,報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時, 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步?;蛘呤褂脽晒馊玖蟂YBR。SYBR可以結(jié)合到雙鏈DNA上面,當(dāng)體系中的模板被擴(kuò)增時,SYBR可以有效結(jié)合到新合成的雙鏈上面,隨著PCR的進(jìn)行,結(jié)合的SYBR染料越來越多,被儀器檢測到的熒光信號越來越強(qiáng),從而達(dá)到定量的目的。
 
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