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ELISA實(shí)驗(yàn)操作流程

更新日期: 2021-06-22
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前期準(zhǔn)備工作:

實(shí)驗(yàn)前樣本和試劑盒室溫平行1小時(shí),如果樣本是凍存樣本,應(yīng)提前拿到2-8攝氏度進(jìn)行解凍(不建議直接室溫解凍)

準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需耗材,蒸餾水(去離子水)。

操作流程描敘:

  1. 將要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的版孔進(jìn)行設(shè)定好,標(biāo)準(zhǔn)品5個(gè)點(diǎn),每個(gè)點(diǎn)設(shè)定平行,需要用到10個(gè)孔,空白只需1個(gè)孔。剩下孔可以做為樣本孔
  2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn),準(zhǔn)備好5個(gè)EP管,然后在每個(gè)EP管中加入150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋液,編上編碼,分別為1,23,4,5,在1號(hào)管中加入150標(biāo)準(zhǔn)品,用槍頭反復(fù)吹打10次左右(注意控制幅度不要過大容易產(chǎn)生氣泡)如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋5秒左右,然后換槍頭,在1號(hào)管中取150微升加入到2號(hào)管,后面過程一次類推。最后稀釋完,前面4個(gè)管中每管液體在150微升,5號(hào)管為300微升。濃度是從大到小。
  3. 標(biāo)準(zhǔn)、樣本、空白加樣:標(biāo)準(zhǔn)是每個(gè)濃度點(diǎn)2個(gè)孔(做平行),每孔加入50微升,加樣過程中注意換槍頭,樣本孔中每孔加入50微升,加樣過程中注意換槍頭,空白孔加入50微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋液或者樣本稀釋液。特別要說明的是,標(biāo)準(zhǔn)加樣和樣本加樣盡量控制在15分鐘內(nèi)加完,如果時(shí)間拖的太長,會(huì)導(dǎo)致前面孔先反應(yīng)后面孔才開始反應(yīng),這樣數(shù)值偏差過大。加完樣后蓋上封板膜,至37攝氏度孵育30分鐘.
  4. 洗版,在孵育過程中可以將洗滌液配好,20ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗滌液(不要漫過版孔),(如果有震蕩儀的話,可以講板子放入震蕩儀上5秒左右,然后靜止三十秒,沒有請忽略次過程)將板子在桌子上晃動(dòng)5秒左右,然后靜置30秒,甩干,拍板。說明:甩干過程盡量要快,1秒內(nèi)就可以完成,不要慢慢傾斜倒掉液體,直接翻板甩掉液體即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙,版孔朝下拍幾下,拍干區(qū)別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為完成。
  5. 每孔加入50微升的酶標(biāo)試劑,此處在空白孔中不需要加(空白孔為空),孵育30分鐘。
  6. 洗版同步驟4
  7. 顯色,先每孔中加入50微升的顯色A液,然后每孔中加入50微升顯色B液。避光37攝氏度顯色15分鐘
  8. 終止,每孔加入50微升的終止液,注意,加完終止液必須在15分鐘內(nèi)讀數(shù),超過時(shí)間讀數(shù)無效。在規(guī)定時(shí)間內(nèi)讀數(shù)都是有效的。

至此,整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束

 

需要額外提醒的是:在做完整個(gè)實(shí)驗(yàn)過儀器之前,儀器最好預(yù)熱半小時(shí),這個(gè)計(jì)算好時(shí)間,也可以直接將儀器一直開著,直到整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部,一般槍頭都懸空,可以將槍頭靠在孔邊緣,但槍頭尖懸空,如果槍頭上殘留液體看整體多少量,不要吹打下去。特別忌諱在版孔內(nèi)壁流向版孔。整個(gè)加液過程不要產(chǎn)生氣泡。(洗滌液除外)

 

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