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產(chǎn)品名稱:

禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)熒光PCR試劑盒

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2023-07-05
熒光PCR試劑盒用于禽傳染性支氣管炎病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對禽傳染性支氣管炎病毒RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

產(chǎn)品概述

  禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)熒光PCR試劑盒說明書
 
  【產(chǎn)品名稱】
 
  商品名稱:禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
 
  Name :Diagnostic Kit for Avian Infectious Bronchitis Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
 
  【包裝規(guī)格】48 份/盒
 
  【預(yù)期用途】
 
  本試劑盒適用于檢測的氣管滲出物、支氣管和肺組織、腎臟或輸卵管等標(biāo)本中
 
  禽傳染性支氣管炎病毒RNA,適用于禽傳染性支氣管炎病毒感染的輔助診斷。其檢
 
  測結(jié)果僅供參考。
 
  【檢驗原理】
 
  本試劑盒用一對禽傳染性支氣管炎病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,
 
  用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對禽傳染性支氣管炎病毒RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用
 
  于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
 
  【試劑組成】
 
  名 稱 規(guī) 格
 
  酶液 50μl×1 管
 
  AIBV 反應(yīng)液 1.0ml×1 管
 
  AIBV 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管
 
  陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管
 
  說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
 
  【儲存條件及有效期】
 
  -20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次,
 
  有效期 12 個月。
 
  【適用儀器】
 
  ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
 
  Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
 
  【標(biāo)本采集】
 
  對于急性呼吸道型的病禽,應(yīng)采取氣管滲出物;對于剛撲殺的病禽,采取支氣管
 
  和肺組織;對于腎型和產(chǎn)蛋下降型的病禽,應(yīng)采取發(fā)病雞的腎臟或輸卵管。
 
  【保存和運(yùn)輸】
 
  上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)
 
  本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
 
  【使用方法】
 
  1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
 
  1.1樣本前處理
 
  每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.05g 于
 
  研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管
 
  中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
 
  1.2RNA 提取
 
  推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取
 
  法),請按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
 
  2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
 
  根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性
 
  對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
 
  試劑 AIBV 反應(yīng)液 酶液
 
  用量 20μl 1μl
 
  3. 加樣(樣本處理區(qū))
 
  將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反
 
  應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
 
  4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
 
  4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
 
  4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇:
 
  檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿
 
  選擇 ROX 參比熒光。
 
  4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
 
  步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號
 
  1 1cycle 42℃ 20min 否
 
  2 1 cycle 95℃ 10min 否
 
  3 40 cycle
 
  94℃ 15sec 否
 
  55℃ 30sec 是
 
  5. 結(jié)果分析判定
 
  5.1結(jié)果分析條件設(shè)定
 
  設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲
 
  線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
 
  范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value
 
  值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
 
  5.2結(jié)果判斷
 
  陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;
 
  可疑:檢測通道 35.0
 
  值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
 
  陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
 
  7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
 
  陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;
 
  陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;
 
  以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。
 
  8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
 
  陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率
 
  為 100%。
 
  低檢測限:5.0×102copies/ml。
 
  精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。
 
       禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)熒光PCR試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:
 
  0511多瘤病毒(BK)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T
  
  0411單純皰疹病毒II型(HSV-II)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T
  
  0311人巨細(xì)胞病毒(HCMV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T
  
  0211人細(xì)小病毒(B19)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T
  
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