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產(chǎn)品名稱:

豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)熒光探針PCR核酸

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2023-07-05
豬胃腸炎流行腹瀉輪狀TGEVPEDVPRV-A熒光PCR根據(jù)豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒設計特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)對核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。本試劑盒適用于檢測分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等樣本中的TGEV/PEDV/PRV-A。

產(chǎn)品概述

豬胃腸炎流行腹瀉輪狀TGEVPEDVPRV-A熒光PCR說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???核酸檢測試劑盒(實時熒光-PCR法)

Name :Porcine transmissible gastroenteritis / porcine epidemic diarrhea virus / swine group A rotavirus (TGEV/PEDV/PRV-A) nucleic acid detection kit (real-time fluorescence -PCR)?

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預期用途】

豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???感染引起的豬急性、熱性、高度接觸性傳染病。其特征為高熱,網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)出血,死亡率高。家養(yǎng)豬和野豬都可以被感染,而且不分品種和年齡。

本試劑盒適用于檢測分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等樣本中的豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???,用于豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒根據(jù)豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???基因組設計特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)對核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

核酸提取液 1.5mL×2 管

酶液 50μL×1 管

反應液 1.0mL×1 管

陽性質(zhì)控品 50μL×1 管

陰性質(zhì)控品 250μL×1 管

注:

1)不同批號試劑不能混用。

2)試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 7 次,有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

病死或撲殺豬,取分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1.樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取

0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中;全血樣本:待血凝固后,取血清 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2DNA 提取

1)對上述處理好的標本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒溫處理 10min,13,000

rpm 離心 5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

2)DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒

(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2.試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑 ASFV 反應液 酶液

用量(樣本數(shù)為 N) 20μL 1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中,21uL/管。

3.加樣(樣本處理區(qū))

 

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4.PCR 擴增(核酸擴增區(qū))

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi);

4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)

NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

5.2結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑:檢測通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)明顯擴增曲線的樣本建議重復試驗,重復試驗結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴增曲線者為陽性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

【參考文獻】

[1]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局. SN/T 1559-2010 非洲豬瘟檢疫技術(shù)規(guī)范[S].

[2]黃萍, 肖家勇, 歐陽振宇. 非洲豬瘟病毒實時熒光定量 PCR 檢測方法的建立[S]. 中國動物檢疫, 2010.

[3]董志珍, 侯艷梅, 趙祥平. 非洲豬瘟病毒實時熒光定量 PCR 檢測方法的建立[S]. 中國獸醫(yī)雜志, 2009.

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